简述BAS-ELISA法的原理,Elisa间接法原理

通过洗涤将在固体载体上形成的抗原-抗体复合物与其它物质分离，最终结合到固体载体上的酶的量与样品中被检测物质的量成一定比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的多少与样品中被检测物质的多少直接相关，因此可以根据显色反应的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化频率高，反应效应可以被大大放大，从而使测定方法达到高灵敏度。

1。用directelisa将抗原直接固定在固相载体上，用酶标参与一抗，即可确定抗原总量。这种一抗的特异性非常重要。优点:操作程序简单，因为不需要使用第二抗体来防止交互反应。缺点:实验中第一抗体要用酶符号，但不是每种抗体都适合用符号，成本比较先进。2.indirectelisa这种方法和直接法类似，只是一级抗体没有酶符号，用带酶符号的二级抗体来识别一级抗体来确定抗原量。

没有酶标记的第一抗体可以保留其最大的免疫反应。缺点:交互响应攻击概率高。3.夹心法(sandwichelisa):检测的抗原包被在两种抗体之间，一种抗体将抗原固定在固体载体上，即捕获抗体。另一种是检测抗体，酶标后可直接确定抗原量；或者没有，然后抗原量由带酶符号的二抗决定。为了防止对同一抗原接触位点的交叉反应或竞争，需要谨慎选择这两种抗体。

{10}

抗原或抗体可以物理吸附在固体载体表面，可能是蛋白质与聚苯乙烯表面之间的疏水部分，保持其免疫活性；2抗原或抗体可与酶形成共价键。主要是抗原和抗体的特异性反应。具体有三点:(1)抗原或抗体能物理吸附在固体载体表面，可能是蛋白质与聚苯乙烯表面之间的疏水部分相互吸附，其免疫活性得以维持；(2)抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶缀合物，该酶缀合物仍能保持其免疫学和酶学活性；

{11}

ELISABasic原理是:1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附法用于IgG定量测定的文章，使用于抗原定位的酶标抗体技术在1966年发展成为测定液体样品中微量物质的方法。该方法原理的基本原理是将抗原或抗体结合到固体载体表面，并保持其免疫活性。抗原或抗体与酶连接形成酶标记的抗原或抗体，该酶标记的抗原或抗体保留其免疫活性和酶活性。

{12}

通过洗涤将在固体载体上形成的抗原-抗体复合物与其他物质分离。最后，结合到固体载体上的酶的量与样品中被检测物质的量成比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的多少与样品中被测物质的多少直接相关。因此，可以根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。由于酶的高催化效率，可以大大放大反应效应，使测定方法达到高灵敏度。

{13}

1971年Engvall和Perlmann发表了一篇关于酶联免疫吸附测定法(ELISA)定量测定IgG的文章，使抗原定位的酶标抗体技术发展成为测定液体样品中微量物质的方法。这种方法原理的基本原理是:①将抗原或抗体结合在固体载体表面，并保持其免疫活性。

{14}

测定时，被测标本(其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同步骤与固相载体表面的抗原或抗体反应。通过洗涤将在固体载体上形成的抗原-抗体复合物与其它物质分离，最终结合到固体载体上的酶的量与样品中被检测物质的量成一定比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的多少与样品中被检测物质的多少直接相关，因此可以根据显色反应的深浅进行定性或定量分析。

用与western相同的抗体标记蛋白质，然后显色。ElisaKit的用法(以人IL4ELISA试剂盒为例):检测原理:本实验采用双抗体夹心ELISA法，抗人IL-4单克隆抗体包被在酶标板上，样品和标准品中的IL-4会与单克隆抗体结合，游离成分被洗去。加入生物素化的抗人IL-4抗体和辣根过氧化物酶标记的抗生物素蛋白，生物素特异性结合抗生物素蛋白；抗人IL-4抗体与单克隆抗体结合的人IL-4结合形成免疫复合物，游离成分被洗去。