我的sybr green从来没冻过,都是4度,但是sybr green的PCRmastermix就另当别论了。tb green与sybr的区别主要有:1,性质:tb green为探针法,而sybr为染色法,Tb green和sybr不同的方法和荧光信号强度。
1、博凌科为的SYBRGreenI荧光染料(荧光定量PCR级波林克中SYBRGreenI与dsDNA的结合荧光信号可增强800 ~ 1000倍。在PCR反应体系中,加入过量的SYBRGreenI荧光染料,特异性加入DNA双链后荧光信号增强,而未加入链中的SYBRGreenI染料分子的荧光保持不变,从而保证荧光信号的增强与PCR产物的增加完全同步。可以在退火阶段或延伸阶段测量荧光。注意事项:1。浓度对荧光PCR结果的影响SYBRGreenI的浓度是保证荧光定量PCR实验成功的关键因素。
但是,在高浓度下,PCR反应会被抑制,PCR反应的效率会降低。所以SYBRGreenI的浓度要根据实际情况进行优化,反应的最终浓度在0.2×到1×之间。2.镁离子浓度的影响增加镁离子浓度可以降低SYBRGreenI对PCR反应的抑制作用。我们建议镁离子浓度比不含SYBRGreenI的普通PCR反应高0.5 ~ 3 mm。
2、QuantqRT-PCR(SYBRGreenSYBRGRENI两步RealTimeRTPCR专用品本试剂盒是以RNA为模板,SYBRGreen嵌合荧光法进行RealTimeRTPCR的专用品。在该试剂盒中,使用了最适合于RealTimeRTPCR的逆转录酶QuantReverseTranscriptase和HotmasterTaqDNApolymerase。
产品特点■ RealTimeRTPCR反应可快速准确分析RNA病毒等微量RNA。■试剂盒采用改良的hotmastertaq聚合酶,具有扩增效率高、扩增灵敏度高、扩增特异性高的特点。■试剂盒中使用的QuantReverseTranscriptase纯度高,性能稳定,能够完成高效快速的逆转录反应。
3、SYBR®Green室温过夜还能用吗没有问题。如果母液浓度较高,建议稀释,分装,冷冻,即使在室温下稀释过夜。但要注意尽可能避免反复冻融,这比在保质期内保持在4度更容易导致降解。我的sybr green从来没冻过,都是4度,但是sybr green的PCRmastermix就另当别论了。
4、SYBR greenPCR溶解曲线有何意义?类似电泳,但比电泳更灵敏,更清晰。\r通过溶出曲线,可以知道目标产物的TM值,是否有杂质峰。普通溶出曲线和电泳结果相对准确。当然,也可以对最终片段进行测序,以最终确定目标产物。\r要点是:根据溶出曲线,可以确定以下几点:\ra。扩增产物是否单一,即是否含有引物二聚体等其他非目的产物。如果溶解曲线在大约90度处突然下降,则产品是纯的。
\r可能用途比较多,最常用的两个要点就是这两个。\r溶出曲线有对应的曲线,看起来更方便。\rDNA溶解曲线表明扩增产物的特异性。\r曲线的横坐标是温度,每个温度点一个横坐标。一般60到98度的纵坐标是荧光强度的变化值(不是强度本身)。加热开始时,虽然荧光强度比较强,但由于双链没有解离,荧光强度保持不变。
博灵科的5、博凌科为的TUREscriptSYBRGreenqRT-PCRKit(两步法荧光定量反转录...
TUREscriptSYBRGreenqRTPCRKit(两步荧光定量逆转录试剂盒)由两个试剂盒组成。一个是逆转录第一链合成试剂盒turescript 1 ststrandcdna synthesis kit(PC18),另一个是2 xsybrgrinqpcrmix(PC33)。首先用逆转录一链试剂盒合成cDNA,然后以cDNA为模板,用2xSYBRGreenqPCRMix进行荧光定量PCR扩增。
6、RealMasterMix(SYBRGreen博凌科维的产品很好,很多实验室都在用。这个牌子挺值得信赖的!RealMasterMix是使用SYBRGreen进行RealTimePCR扩增的全新预混合系统。RealMasterMix含有dNTP、增强剂、稳定剂等。具有优化的比例以提高产品特异性和反应灵敏度。同时加入ROX作为内标染料,使RealTimePCR中的荧光达到最佳状态。
7、如何设计 sybr green法荧光定量pcr引物primer荧光定量PCR是利用荧光定量PCR仪器(如ABI7500、stepone、ROCheLightCycler、BioRadCFX96等)对初始模板量进行定量分析。)实时跟踪PCR每个循环的荧光信号值。成功的荧光定量PCR反应不仅需要稳定的仪器、高质量的Taq酶和良好的模板质量,还需要高质量的引物对。获得高质量引物对的前提是引物的设计必须精细化。
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(1)利用NCBI数据库,查询基因序列。登录NCBI官方主页:。在栏目项中选择“基因”,输入“IL6homo”作为关键词,如下图,点击“搜索”。(2)结果如下。一般第一个基因就是要查询的基因,所以我们需要注意这里的“别名”一栏,因为很多基因都有很多别名,所以查询的时候需要注意。定义基因后,直接点击进入人类IL-6基因主页。
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8、taqman和 sybr green的区别taqman是探针法,SYBRGreen是染色法。一般来说,SYBRGreen不如Taqman特异,因为没有特异探针,但如果SYBRGreen的结果是特异的(可以通过溶出曲线验证),就没有问题。相反,有时候SYBRGreen的扩增曲线更漂亮。
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9、tb green和 sybr区别不同的方法和荧光信号强度。1.方法:taqman采用探针法,SYBRGreen一般采用染色法。2.荧光信号强度。SYBRGreen的荧光信号强度与双链DNA的数量有关,而taqman的荧光信号强度与周围光照有关。tb green与sybr的区别主要有:1。性质:tb green为探针法,而sybr为染色法。
3.荧光信号强度:sybr的荧光信号强度与双链DNA的数量有关,而tb green的荧光信号强度与周围光照有关。4.放大曲线:有时候sybr的放大曲线更漂亮,总的来说,tb green和sybr在性质、特异性、荧光信号强度和扩增曲线上有明显的差异。选择正确的染料或探针取决于研究的具体需要和实验条件。
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