消化液检测蛋白质含量,双缩脲试剂检测蛋白质含量实验

样品用浓硫酸和催化剂加热消化分解蛋白质，其中的碳和氢被氧化成CO2和H2O逸出，而样品中的有机氮被转化成氨并与硫酸结合生成硫酸铵，用NaOH中和生成NH3`H2O，加热后分解成氨，被硼酸吸收。

一般根据产品标准的要求选择测定方法。当然，食品中蛋白质的测定最常用的方法是凯氏定氮法:常量凯氏定氮法和微量凯氏定氮法。称取2.000克于定氮瓶中，加入20毫升浓硫酸、0.2克硫酸铜和3.0克硫酸钾，然后消化、消化至液体澄清，倒入100毫升带塞比色管中，清洗定氮瓶三次，将洗涤液并入100毫升带塞比色管中，加蒸馏水至100。在瓶中收集10mL的2%硼酸溶液，用2滴甲基红和亚甲基蓝作指示剂，用购买的0.1000标准溶液滴定，步骤结束。

蛋白质含量测定方法有凯氏法、缩二脲法、福林――酚试剂法、考马斯亮蓝法、紫外吸收法等。1.微量凯氏定氮法:含氮有机物分解产生氨(消化)，氨与硫酸反应生成硫酸铵。碱化后分解释放出氨，用蒸汽将氨蒸成酸性溶液。根据这种酸性溶液的中和程度，可以计算出样品的氮含量。2.缩二脲法:缩二脲是两分子尿素在180℃左右加热，释放出一分子氨的产物。

3.福林――酚试剂法:这蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。在过去，这种方法是应用最广泛的方法。近年来，由于试剂B. 4制备困难，逐渐被考马斯亮蓝法取代。考马斯亮蓝法:bradford于1976年建立的考马斯亮蓝法是根据蛋白质与染料结合的原理设计的。该方法是目前最灵敏的蛋白质测定方法。5.紫外吸收法:在分子蛋白质中，酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环上含有共轭双键，使得蛋白质具有吸收紫外光的性质。

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目前食品中蛋白质含量的测定通常采用凯氏定氮法。凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮含量的方法。即在催化剂的存在下，用浓硫酸消化样品将有机氮全部转化为无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，用水蒸气蒸馏掉，用过量的酸溶液吸收，再用标准碱滴定，即可计算出样品中的氮含量。因为蛋白质的含氮量是相对恒定的，所以可以由它的含氮量蛋白质 含量计算出来，所以这种方法是经典的蛋白质定量方法。

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蛋白质蛋白质是生物的主要成分，各类酶和细胞因子的重要性属于蛋白质，蛋白质不言而喻。人体摄入的蛋白质营养不仅是量，还有种类和成分。蛋白质的营养价值主要取决于人体的吸收程度消化以及这类蛋白质所含氨基酸的种类和组合。容易被人体吸收利用的-1蛋白质的营养价值高。从消化的角度来看，动物蛋白质比植物蛋白质更容易吸收。

1，凯氏定氮法蛋白质用这种方法测定的称为“粗蛋白”，氮的来源可能是真的蛋白质，非蛋白质乳制品中正常含有的化合物，或人为有意添加的有害含氮化合物。2.高效液相色谱样品用三氯乙酸溶液乙腈提取，阳离子交换固相萃取柱净化，高效液相色谱法测定，外标法定量，高效液相色谱的测定步骤(1)HPLC参考条件(2)标准曲线的绘制(3)定量测定(4)结果的计算(3)液相色谱质谱/质谱样品用三氯乙酸溶液提取，阳离子交换固相萃取柱净化，液相色谱质谱/质谱测定确认，外标法定量。