基因克隆原理,目的基因克隆的原理

在过去的几十年中，分子生物学家开发了许多技术，可以用来更快地构建目标DNA序列结构，以简化和标准化克隆过程。你熟悉这些克隆技术吗？我们来看看这些技术的特点。限制性内切酶消化连接法长期以来被认为是一种传统的克隆方法。这种方法廉价灵活，可分为酶切和连接两步。限制性内切酶可以特异性地与一个叫做限制性内切酶识别序列的DNA片段结合，切割双链DNA。

Transfer基因Technical原理将人工分离和修饰的质基因引入生物体内基因群，从而达到改造生物的目的。Zhuan 基因技术的理论基础来自于进化的分子生物学。基因该片段可以来源于基因特定生物的组基因中所要求的靶标或来自特定序列的合成DNA片段。将DNA片段转入特定生物体内，与自身基因群重组，然后从重组体中人工选择世代，获得特定遗传性状表现稳定的个体。

植物转化基因方法:1。农杆菌介导的转化；2.基因枪介导转化；3.动物改造基因技术:1。细胞核显微注射；2.精子介导的转化。-1/技术与传统技术的关系在过去的几千年中，农作物改良的方式主要是选择和利用自然突变产生的优良品系基因和重组品系，通过随机和自然的方法积累优良品系基因。转基因的技术与传统技术是一脉相承的，其本质是通过获得优秀进行基因改良基因。

、T4连接酶介导的DNA 克隆传统分子克隆、通常需要用相同的限制性内切酶切割载体和目的片段，使载体和片段产生相同的粘性或平端，并用T4DNA连接酶连接它们，转化它们并挑出阳性-0为了更方便地在DNA上进行克隆、载体

{10}

常规连接是三个分子一起反应的过程(图1)。载体、片段和连接酶碰撞并反应以完成连接过程。为了得到更正的克隆，我们会倾向于加入更多的片段、载体和连接酶来提高分子碰撞的概率，但同时会遇到一个问题。过高的DNA浓度和T4连接酶浓度会增加分子间相互作用，促进串联和载体自连接的形成，导致片段和酶的利用率降低。

{11}

Plant-1克隆08姚桂鹏简介，医学二类克隆(克隆)是指一个细胞或个体无性繁殖产生的子代群体。所谓-1克隆是指基于大肠杆菌的DNA片段(或基因)的扩增，主要过程包括目的DNA的获取、重组载体的构建、受体细胞的转化、重组细胞的筛选和增殖。主要介绍植物基因、载体基因 克隆、工具酶基因 克隆的特性。

{12}

蓝白点筛选是重组体筛选的一种方法:是根据载体的遗传特性筛选重组体，如α互补、抗生素基因等。目前使用的许多载体都携带有大肠杆菌DNA的一小段，含有β半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区插入一个multi 克隆 site (MCS)，不破坏阅读框，但可以在β-半乳糖苷酶的氨基末端插入几个氨基酸而不影响其功能。该载体适用于能编码β-半乳糖苷酶C端序列的宿主细胞。

{13}

这样，lacZ 基因实现了缺乏近端操纵基因片段的宿主细胞与具有完整近端操纵基因片段的质粒之间的互补，称为α互补。α互补产生的LacZ 细菌，在显色底物XGal存在下，在诱导剂IPTG的作用下，产生蓝色菌落，因此容易鉴别。但当外源DNA插入质粒的multiple 克隆位点时，几乎不可避免地导致氨基端片段没有α-互补能力，使重组质粒的细菌形成白色菌落。

克隆载体为环状双链DNA。原理 of PCR:首先，当模板热变性时，双链模板被分离成两条单链模板，然后两条引物与各自的模板聚合酶结合，催化dNTP延伸引物，形成两对长链模板，因为延长时间只够完成目的基因，不足以完成整个循环的延长。所以得到的模板的互补链有头有尾，这是一个循环。再热变性，刚从引物变成模板的模板，解开成两条单链。