bradford assay 原理,Bradford Assay进行定量

噬斑assay原理原理是凝胶阻滞试验(凝胶阻滞assay)、核跑assaynorthern印迹杂交(northern印迹杂交)。根据...我们用的是Bradford蛋白结合assay好像挺常见的，网上有协议，当然也有其他方法，可以搜索“蛋白质定量法”，自己看。

我之前做了一个ATPase参考，大家借鉴一下。CellMembranePerformance Cells ewgrowindimem/10% FBS with antibiotic splussfungizoneuintilcells 8090%汇合并提供了ependentpendorftubelabed标记的“细胞”，细胞用500μlcellsuspensionbu Ffer(CBS)保存我们使用Bradford蛋白结合assay这似乎很常见。网上有协议，当然也有其他方法。可以搜索“蛋白质定量法”，自己看。根据样品溶液成分的不同，可采用不同的蛋白质含量测定方法(主要考虑成分是否干扰测定方法)。常用的比较精确的化学方法有劳里法、布拉德福法、BCA法等。

GSTpulldown实验是一种验证酵母双杂交系统的有效体外试验技术，近年来受到越来越多学者的青睐。其基本原理原理是将目标蛋白GST融合蛋白亲和固定在谷胱甘肽亲和树脂上，作为与目标蛋白亲和的支持物，起“诱饵蛋白”的作用。目标蛋白溶液通过柱子，从柱子中可以捕获与其相互作用的“捕获蛋白”(目标蛋白)，结合物被洗脱并通过SDSPAGE电泳进行分析。

诱饵蛋白和捕获蛋白可通过细胞裂解物、纯化蛋白、表达系统和体外转录翻译系统获得。该方法简单易行。GST:glutathioneStransferase的分子克隆(第3版)详细介绍，很容易理解GST融合蛋白沉淀技术是利用GST对谷胱甘肽偶联珠的亲和力，从非相互作用蛋白的溶液中纯化出相互作用蛋白。

成功完成WesternBlot检测必须满足四个条件:1 .凝胶洗脱:蛋白质在转移过程中必须从凝胶中洗脱出来，如果蛋白质仍然被困在凝胶中，将无法在膜上进行分析；2.蛋白质在转移过程中必须吸附在膜上，如果蛋白质没有被吸附，就不会在膜上进行分析；3.在处理过程中它仍然被截留在膜上:蛋白质在转移后的处理过程中必须保持吸附在印迹膜上；4.在处理过程中是可及的:被吸附的蛋白质必须能够与检测试剂接触；如果蛋白质被掩盖，则在WB检测中无法成功检测，因此设置适当和正确的质控品至关重要。只要这些控件设置正确，就能快速准确的发现WB的问题，保证实验结果的准确性和特异性！

你基本都说了。DNAprobe和链霉亲和素杂交在一起，链霉亲和素可以和磁头亲和结合，所以孵育后核提取液会流过珠子，DNAprobe是400bp，所以和目标DNA的结合力相当高，所以目标DNA会留在珠子里，其他不能结合的会被去除。最后，用特定的洗脱剂(对应于链霉亲和素)洗脱，得到目标DNA。

This 原理也被别人引用。我使用过实际的BCA盒，它确实比考马斯亮蓝试剂灵敏得多。操作也很简单原理简介BCA(bicinchonicacid)蛋白质浓度定量试剂盒是在国际上常用的蛋白质浓度检测方法之一BCA的基础上改进而来的。众所周知，二价铜离子在碱性条件下可被蛋白质还原成一价铜离子，一价铜离子与一种独特的BCASolutionA(含BCA)相互作用产生灵敏的显色反应。

水溶性复合物在562nm处有很强的吸光度，吸光度与蛋白质浓度在很宽的范围内有很好的线性关系，根据吸光度值可以计算出蛋白质浓度。产品特点1。步骤简单，45分钟内即可完成测定，比经典的Lowry法快4倍，更方便。2.灵敏度高，检测浓度下限达到25μg/ml，最低检测蛋白量达到0.5μg，待测样品体积为120 μ l..

Northern印迹。原理:将RNA固定在尼龙膜上并用DNA探针鉴定待测mRNA这是一种将RNA从琼脂糖凝胶转移到硝酸纤维素膜上的方法。DNA印迹技术由Southern于1975年创立，被称为Southern印迹技术。RNA印迹技术正好对应DNA，所以称为Northern印迹杂交。类似于这种原理的蛋白质印迹技术称为Westernblot。

RNA变性后，有利于在转移过程中与硝酸纤维素膜结合。也可在高盐中转移，但烘烤前与膜结合不牢固，转移后用低盐缓冲液洗脱，否则会洗脱RNA。EB不能加入胶中，因为它会影响RNA和硝酸纤维素膜的结合。为了确定片段大小，可以在同一块胶上加入分子量标记进行电泳，然后将标记切割、着色、拍照，样品胶进行Northern转印。

原理是凝胶阻滞试验(Gelretardation assay)，称为DNA迁移率变化。原理:凝胶电泳中，由于电场的作用，裸露的DNA分子向正极移动的距离及其分子量，过程:首先制备细胞蛋白提取液(理论上含有特殊转录因子)，用放射性同位素标记待测物，分析实验结果:如果放射性标记条带集中在凝胶底部，则抗原或抗体吸附在固相载体表面。

抗原或抗体可通过间接法、双抗体夹心法或竞争法来测定。将已知的特异性抗体包裹在固体载体(塑料板或纸的凹孔)上，加入待测样品，样品中的抗原可与载体上的抗原结合，洗去未结合的物质，加入抗原的酶标抗体，洗去未结合的酶标抗体，加入底物显色，用酶免疫分析仪测定颜色的光密度，即可定量测定抗原，间接ELISA法常用于检测特异性抗体。