梯度洗脱的原理,高效液相色谱梯度洗脱原理

最近一直在用，用了很久。看了下面的内容，还是不明白。请随意提问。可以一起讨论，注意模板。有两个作用:(It 原理是一样的，不同的物质在相同极性的溶剂中在平板上跑不同的距离，要在紫外灯下荧光观察，溶剂要放在可以盖的瓶子里。)首先，检查。在色谱夜中静置(溶剂色谱夜一般是用不同比例的乙酸乙酯和石油醚配制，从1:1开始)，通过观察板上物质的情况来改变比例。

我猜你做的是反相HPLC吧？如果是梯度 洗脱，可以从这几个方面考虑:1。支柱，很多人认为应该首先考虑流动相，但实际上支柱是必须首先考虑的因素。如果色谱条件可以在不同的色谱柱上重现，则该方法的持久性是理想的。色谱柱需要考虑的因素有粒径、表面孔径、碳负载、结合方式、密封方式等。简单来说，换几个牌子。2.流动相的组成和改性剂就不用说了。

显影剂的比例取决于试验。一般根据文献报道的这类化合物用什么样的展开剂，先试用这类展开剂，然后不断尝试配比，直到找到分离效果好的展开剂。显影剂的选择条件:①对所需组分有良好的溶解性；②能分离成分；③待测组分的Rf在0.2 ~ 0.8之间，定量测定在0.3 ~ 0.5之间；(4)不与待测组分或吸附剂发生化学反应；⑤沸点适中，粘度低；⑥展开后，组分斑点圆而集中；⑦混合溶剂最好是新鲜配制的。

HPLC 原理如下:1 .高压:流动相是液体，流过色谱柱时受到很大阻力。为了快速通过色谱柱，必须对载液施加高压。2.速度快:分析速度快，载液流速快，比经典液相色谱快很多。通常分析一个样品需要15到30分钟，有些样品甚至可以在5分钟内完成，不到1小时。3.效率高:分离效率高。可以选择固定相和流动相，达到最佳的分离效果，比工业蒸馏塔和气相色谱仪高出许多倍。

5.应用范围广:高效液相色谱可以分析70%以上的有机化合物，特别是沸点高、大分子、极性强、热稳定性差的化合物的分离分析，显示出优势。6.色谱柱可以重复使用:不同的化合物可以通过一根色谱柱分离。7.样品体积小，易于回收:样品通过色谱柱后不被破坏，可以收集或制备单一组分。在高效液相色谱分析过程中，储液瓶中的溶剂被泵吸入色谱系统，然后输出，经过流量和压力测量后，再引入进样器。

液相色谱原理大多是分配色谱，也就是说，样品被固定相(柱填充)吸附后，在流动相洗脱的过程中，样品的极性不同，在流动相中的溶解浓度也不同，有的互溶，有的不互溶。其中有一部分具有一定的溶解性，可以按照这个原理进行分离。与固定相作用时间长的洗脱，不易吸附的，先洗脱，随流动相流动。根据你的样品成分极性来解释，同时也要看你用的是正柱还是反柱。如果使用反相色谱柱(C8、C18等)。)和柱填料的极性弱，则待分析的物质首先出峰；

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HPLC是在经典色谱法的基础上，引入了气相色谱法的理论。技术上，流动相改为高压输送(最大输送压力可达4.9107 pa)；色谱柱以特殊方式填充小粒径填料，使柱效远高于经典液相色谱(每米塔板数可达数万或数十万)；同时在柱后连接一个高灵敏度的检测器，可以连续检测流出液。特点:1。高压:液相色谱以液体为流动相(称为载液)，液体流经色谱柱，受到的阻力很大。为了快速通过色谱柱，必须对载液施加高压。

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2.高速:柱内流动相流速比经典色谱快得多，一般可达1 ~ 10 ml/min。高效液相色谱所需的分析时间比经典液相色谱少得多，一般不到1小时。3.高效:最近开发了很多新的固定相，大大提高了分离效率。4.高灵敏度:高灵敏度检测器已广泛应用于高效液相色谱，进一步提高了分析的灵敏度。比如荧光检测器的灵敏度可以达到1011g g，另外，样品量很小，一般只有几微升。

如果你想给新手讲解一个新的内容，我觉得最好的办法是用简单易懂的方式把原理的基本框架串清楚，让他能很好的理解，然后不断的补充细节。我给你举个例子，现在有一堆死宅，里面有三种人类，喜欢胸差的，喜欢胸大的，喜欢男生的。怎样才能正确的把它们分开？很简单，在跑道上(稳定期)放一定量的丰胸书(洗脱剂)，然后让这群死宅赛跑，因为喜欢母乳的死宅们看到书要来了，跑的很慢(极性很大)；而胸控差，喜欢男生的死宅，看不到自己感兴趣的书，会正常跑到终点(极性几乎很小)。