碘化丙啶染色原理

(2)染色Cell:Jimsa染色，Ritchie 染色等常用。1.原理:用于活细胞线粒体染色染色，这种染料的积累取决于膜电位，FITC(异硫氰酸荧光素):绿色530nmPE(藻红蛋白):橙色575nmPerCP(多粘菌素叶绿素蛋白):深红色675nmPI( 碘化丙啶):波长620 nm和488 nm的橙红色氩离子激光激发APC(别藻蓝蛋白):波长660 nm的红色He-Ne激光和红色二极管激光激发(二)免疫荧光技术常用的标记染色直接免疫荧。

碘化丙啶(propidiumiodide，PI)检测凋亡细胞早期死亡时细胞膜通透性的差异，是区分凋亡与坏死的重要指标。在凋亡细胞最终溶解阶段之前，细胞膜通透性没有明显变化，分子量相对较大的荧光染料(如PI)与DNA结合不能及时进入凋亡细胞，而分子量相对较小的荧光染料(PI)。

主要操作步骤如下:①组织块用0.25%胰蛋白酶消化30 min ~ 1 h..②用200-400目筛网过滤细胞，得到单细胞悬液。③ 75%乙醇(20℃预冷)固定细胞1h。④加入PI(终浓度50g/ml)和无DNA酶污染的RNase(终浓度50g/ml)1ml染色30min ~ 1h。⑤流式细胞仪检测细胞周期，检测细胞凋亡及凋亡率。培养48h后，将细胞分为两部分，一部分为碘化丙啶(pI) 染色，倒置相差显微镜下观察细胞核的形态变化。

1，原理:用于活细胞线粒体染色，这种染料的积累依赖于膜电位。2.定义:MitoTrackerRedCMXRos是一种红色荧光染料，乙醛固定后染料可稳定保存。MitoTrackerGreenFM是一种线粒体绿色荧光染料，其定位于线粒体的能力似乎不受线粒体膜电位的影响。该染料可用于活细胞上，但乙醛固定后不能稳定储存。

MitoTrackerRedCMH2XRos是MitoTrackerRed(M7512)的非荧光还原态，只有被氧化时才会发出荧光。该染料还可以应用于活细胞的线粒体，并且其积累取决于膜电位。乙醛固定后，染料可以稳定保存。MitoTracker DeepRedFM是一种远红色荧光染料(吸收波长/发射波长约为640/662nm)，用于对活细胞的线粒体进行染色染色，这种染料的积累依赖于膜电位。

凋亡的形态学检测根据凋亡细胞固有的形态学特征，设计了许多不同的凋亡形态学检测方法。1.光学显微镜和倒置显微镜(1) No 染色 cell:凋亡细胞体积变小，变形，但细胞膜完整但有泡沫，凋亡后期可见凋亡小体。贴壁细胞萎缩、变圆、脱落。(2)染色Cell:Jimsa染色，Ritchie 染色等常用。凋亡细胞的染色细胞质浓缩，边缘化，核膜破裂，染色细胞质分裂为块状和凋亡小体。

常用的DNA特异性染料有:HO33342(Hoechst33342)、HO33258(Hoechst33258)、DAPI。三种染料与DNA的结合是非嵌入的，主要在DNA的AT碱基区域。当被紫外光激发时，它会发出明亮的蓝色荧光。Hoechst是一种与DNA特异性结合的活性染料。用蒸馏水配制成浓度为1毫克/毫升的储存溶液，并用PBS稀释至最终浓度为2 ~ 5毫克/毫升。

(1)免疫荧光技术中最常用的荧光染料是FITC、藻红蛋白(PE)和罗丹明。FITC(异硫氰酸荧光素):绿色530nmPE(藻红蛋白):橙色575nmPerCP(多粘菌素叶绿素蛋白):深红色675nmPI( 碘化丙啶):波长620 nm和488 nm的橙红色氩离子激光激发APC(别藻蓝蛋白):波长660 nm的红色He-Ne激光和红色二极管激光激发(二)免疫荧光技术常用的标记染色直接免疫荧光

(3)细胞自体荧光自体荧光信号是一种噪声信号，在大多数情况下会干扰特定荧光信号的分辨和测量。在免疫细胞化学等测量中，如何提高信噪比是低结合水平荧光抗体的关键，一般来说，含量越高的分子(如核黄素、细胞色素等。)能在细胞成分中产生自发荧光，自发荧光越强；培养细胞中死细胞与活细胞的比例越高，自发荧光越强；细胞样品中亮细胞的比例越高，自发荧光越强。