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1、做好westernblot需要注意各种细节,转给需要的你!做好西部需要注意各种细节。工欲善其事,必先利其器。先说蛋白的提取。1.在样品收集前3分钟制备细胞裂解物(现已准备好使用),RIPA: 蛋白酶抑制剂:磷酸酶抑制剂99:1:1。6孔平板收集蛋白每孔需要200ul,计算用量。以刘孔蛋白为例,按比例加入RIPA1200ul、蛋白酶抑制剂12ul、磷酸酶抑制剂12ul,混匀后置于冰上。
3.向每个孔中加入200ul新鲜制备的裂解液,立即将其置于冰上,并在振荡器上裂解30分钟。1.取出动物组织(脑、肺等。)并分成三份或三份以上(一份WB,一份qPCR,一份备用),取出后立即80℃保存。(注:取后立即将一块组织在80℃冷冻。样品反复冷冻会影响蛋白待测,所以最好用新鲜样品做实验。) 2.制备细胞裂解液(现已准备好使用)。组织:RIPA1mg:10ul,可根据实际情况调整。
2、叙述生物样品中 蛋白质含量测定方法有哪些概述:目前常用的古代经典方法有四种,即定氮法、缩二脲法、福林-酚试剂法(Lowry法)和紫外吸收法。此外,还有一种近十几年来广泛应用的新的测定方法,即考马斯亮蓝法(Bradford法)。其中Bradford法和Lowry法的灵敏度最高,比紫外吸收法高10 ~ 20倍,比缩二脲法高100多倍。
注:值得注意的是,后四种方法在任何条件下都不能应用于任何形式的蛋白 mass,因为用这四种方法都可以确定一个蛋白 mass的解,可能得到四种不同的结果。每种方法都不完美,各有利弊。在选择方法时,要考虑:①实验要求的灵敏度和准确度;② 蛋白质量的本质;③溶液中的干扰物质;(4)测定所需的时间。Bradford法因其突出的优点而得到越来越广泛的应用。
3、哪位老师曾经使用过博凌科为的BCA 蛋白 定量 试剂盒,感觉这个产品好不好...我现在用的是博灵科的。BCA(bicinchoninicacid)法蛋白concentration定量试剂box是在国际上常用的浓度检测方法之一BCA法的基础上改进而来。众所周知,二价铜离子在碱性条件下可被蛋白还原为一价铜离子,一价铜离子与独特的BCASolutionA(含BCA)作用产生灵敏的显色反应。
水溶性络合物在562nm处表现出强的光吸收,吸光度与蛋白浓度在较宽的范围内呈良好的线性关系,因此可根据光吸收值计算蛋白浓度。其产品特点是:步骤简单,45分钟内完成测定,比经典的Lowry法快4倍,更方便。灵敏度高,检测浓度下限达到25μg/ml,最小检测量蛋白为0.5μg,待测样品体积为120 μ l,BCA法测定的蛋白浓度在大多数样品中不受洗涤剂等化学物质的影响,可与样品中5% SDS、5% TritonX100和5% Tween20、60、80兼容。
4、BCAproteinassay 试剂盒是检测 蛋白浓度的原理是什么这个原理也被别人引用。我用过实际的BCA盒,确实比考马斯亮蓝试剂灵敏很多。操作也很简单。BCA(bicinchonicacid)法蛋白concentration-2试剂box是在国际上常用的浓度检测方法之一BCA法的基础上改进而来的。众所周知,二价铜离子在碱性条件下可被蛋白还原为一价铜离子,一价铜离子与独特的BCASolutionA(含BCA)作用产生灵敏的显色反应。
水溶性络合物在562nm处表现出强的光吸收,吸光度与蛋白浓度在较宽的范围内呈良好的线性关系,因此可根据光吸收值计算蛋白浓度。产品特点1。步骤简单,45分钟内即可完成测定,比经典的Lowry法快4倍,更方便。2.灵敏度高,检测浓度下限达到25μg/ml,最小检测量蛋白为0.5μg,待测样品体积为120 μ l..
5、(Bradford法BCA蛋白定量检测试剂箱康威世纪,500T,¥220。Bradford蛋白Quality-2试剂Box是根据国际上最常用的蛋白浓度检测法——考马斯亮蓝G250研制而成,并实现了。其原理是在酸性条件下,考马斯亮蓝G250与蛋白结合,使染料的最大吸收峰从465nm变为595nm。在一定的线性范围内,反应液在595nm处吸光度的变化与反应量成正比蛋白,可测出595nm处吸光度的增加。
6、 bca法测 蛋白浓度为什么稀释 蛋白质浓度第一,可能血清样本比较珍贵,所以样本用得越少,在检测准确的前提下,获得的浓度数据越好。二是由于检测手段的限制,浓度过高的样品无法准确检测。所以必须稀释到标准曲线的线性范围。用BCA法测定蛋白质量浓度原理:BCA与含二价铜离子的硫酸铜等混合后变成苹果绿试剂composition试剂,即BCA作品试剂。在碱性条件下,当BCA与蛋白、蛋白结合时,Cu2 还原为Cu ,而works 试剂由苹果绿变成紫色的络合物。
BCA 蛋白浓度测定试剂盒,艾博金蛋白质量-2试剂盒(BCA法)提供了一种简单快速的方法。成分:试剂A、100mL 试剂B、2mL标准蛋白(BSA)1mL×2、1mg/mL储存条件运输温度:室温(标准蛋白4~8℃运输)储存温度:室温(标准蛋白20℃储存)有效期:12个月使用方法1:法BCA工作溶液的制备:根据标准和样品。
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