westtern杂交原理

在Western 杂交中，westernblot 原理的工作与Southern或Northern 杂交相似，但westernblot使用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，检测的对象是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”使用的是标记的二抗。什么是Westernblot方法及其应用？什么是Westernblot方法？Westernblot法是一种将电泳与KIJSA相结合的技术，分为电泳、转印和酶免疫分析三个阶段。

protein(转录水平检测特定mRNA，翻译水平检测特定蛋白)主要用于用探针或抗体检测mRNA。1.外源基因转录水平的鉴定基因表达分为转录和翻译两个阶段。转录是以DNA(基因)为模板生成mRNA的过程，翻译是以mRNA为模板生成蛋白质的过程。检测外源基因表达就是检测特定mRNA和特定蛋白的产生。因此，基因表达检测分为两个层次。

转录水平检测的主要方法是Northern 杂交，以DNA或RNA为探针检测RNA链。像南方的杂交，北方的杂交包括斑点杂交和斑点杂交。外源DNA在植物中的转录和表达也可以通过逆转录PCR来检测。Its 原理以植物总RNA或mRNA为模板进行逆转录，然后通过PCR进行扩增。

印迹技术是将凝胶中分离出来的生物大分子转移(印迹)或直接放在固定化介质上进行检测分析的技术。目前有:1。Southern印迹法；2.Northern印迹法；3.蛋白质的Westernblotting和其他三种类型。原理1，Southernblotting硝酸纤维素膜或尼龙滤膜对单链DNA有很强的吸附能力。电泳后，凝胶被DNA变性，覆盖上上述滤膜，然后在上面压上多层干燥的吸水纸。随着深层盐溶液的向上抽吸，凝胶上的单链DNA会转移到滤膜上。

2.Northernblotting又称Northern blotting，基本原理与Southernblotting相同，主要用于检测某一组织或细胞中已知特定mRNA的表达水平，也可以比较同一基因在不同组织和细胞中的表达情况。

灵敏度差。一般采用间接法，即如果只使用一抗，检测到的最低目标蛋白为1ng。如果同时使用一抗和二抗，最低目标蛋白是0.01ng，具体放大倍数没有研究过，但至少是100倍。详细回答，谢谢。这是研究生面试的问题。原因如下:1。一抗识别的抗原数量有限。假设一分子抗体识别一分子抗原，一分子抗原上只标记了36个分子，最后只能检测到36个标记分子。