fitc pi检测细胞凋亡,pi染色检测细胞凋亡原理

细胞死亡方式主要有两种，包括细胞坏死和-4凋亡(叛教)。检测细胞凋亡，有哪些方法？1.-4凋亡-3/的形态学根据凋亡-4/的固有形态学特征，人们设计了许多不同的，最常用的-4凋亡-3/方法是什么？细胞凋亡of检测细胞凋亡和坏死完全不同细胞。

channel PIFL2通道双重染色细胞。AnnexinVFITC(FL1通道) PI(FL2通道)双重染色细胞，FITC阳性 PI阴性细胞 100%是早期凋亡%。磷脂酰丝氨酸(PS)正常情况下位于细胞膜的内侧，但在细胞 凋亡的早期，PS可以从细胞膜的内侧反转到/1234。AnnexinV是一种Ca2 依赖的磷脂结合蛋白，分子量为35~36kD，能高亲和力地特异性结合PS。

凋亡blank不是最好的阴性对照，但IGg同型对照是最好的，所以只根据FITC和PI染色就能看出结果。FITC标记的AnnexinV染色先于-4凋亡或细胞出现伴随坏死的膜完整性丧失。因此，在使用FITC标记的AnnexinV染色时，通常结合使用碘化丙啶(PI)或7aad等活性染料，便于研究者识别早期凋亡 细胞(PI阴性，FITCAnnexinV阳性)。

AnnexinVFITC/PI荧光显微镜双重染色观察法1。悬液细胞染色后，在载玻片上滴一滴细胞悬液，盖上盖玻片细胞并在荧光显微镜下观察。2.贴在墙上细胞可以染得像悬浮液细胞，然后在载玻片上滴一滴悬浮液细胞，盖上盖玻片细胞，在荧光显微镜下观察。贴墙细胞也可以在盖玻片上培养(根据盖玻片大小，放入24孔或12孔细胞培养板)，然后诱导细胞 凋亡。

先用PBS冲洗两次，向孔中加入400μlBindingBuffer。加入5μlannexivengfp和10μlPro pidiumIodide，混匀，室温避光反应10分钟。3.将盖玻片倒置在载玻片上，在荧光显微镜下观察绿色AnnexinVEGFP荧光信号和PI红色荧光信号。

1。主磷脂酰丝氨酸(PS)正常情况下位于细胞膜的内侧，但在细胞 凋亡的早期，PS可从-4转移。AnnexinV是一种Ca2 依赖的磷脂结合蛋白，分子量为35~36kD，能高亲和力地特异性结合PS。AnnexinV用荧光素(FITC，PE)或生物素标记，标记后的AnnexinV作为荧光探针，可使用细胞仪器或荧光显微镜生成检测-4凋亡。

Hardware 检测工具很多，分很多方面简单告诉你:1。cpu测试软件，建议用SUPER pi，或者棋王测试程序，检测软件建议用CPUZ。2.内存测试:memTest，目前公认的比较好的测试软件；3.动力测试:OCCT，这是肯定的；4.显卡:当然是3DMARK软件，这是业界最认可的测试软件。软件推荐检测 GPUZ。

凋亡的特征显微标志是凋亡小体的出现；坏死的特征性变化为核浓缩、核碎裂、核溶解，细胞边界不清，细胞淡染。细胞凋亡of检测细胞凋亡和坏死完全不同细胞。细胞凋亡检测的方法很多。下面是一些常用的测定方法。1.-4凋亡-3/的形态学根据凋亡-4/的固有形态学特征，人们设计了许多不同的。

贴墙细胞缩小，变圆，脱落。(2)染色细胞:常用姬姆萨染色法和瑞氏染色法。凋亡 细胞的染色质浓缩、边缘化，核膜破裂，染色质分为块状和凋亡小体，是典型的凋亡形状。细胞核染色质的进展一般用荧光显微镜和激光共聚焦扫描显微镜判断。常用的DNA特异性染料是HO33342(Hoechst33342)和HO33258(Hoechst33258)。

细胞死亡方式主要有两种，包括细胞坏死和-4凋亡(凋亡)。细胞坏死是一种很早就被认可的细胞死亡模式，而细胞 凋亡死亡模式近年来也逐渐被认可并受到越来越多的关注。两种死亡方式最重要的区别是细胞坏死会释放细胞内质，引起炎症反应，而细胞 凋亡不会暴露细胞内质。

细胞 凋亡是生物体内的普遍现象，胚胎形成、个体发育、衰老和损伤细胞与凋亡密切相关。细胞 凋亡在免疫学上也很重要。例如，T 细胞在胸腺中发育。经过负选择和正选择，95%的胸腺细胞发生-。检测细胞凋亡有多种方法，如电镜或光学显微镜下的形态学观察，细胞DNA提取液的DNA阶梯电泳实验等。

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1。形态学观察方法1。HE染色及光镜观察:凋亡 细胞呈圆形，细胞核深染，细胞质浓集，染色质成团，细胞表面有“出芽”现象。2.吖啶橙(AO)染色，荧光显微镜观察:活的细胞细胞核呈黄绿色荧光，细胞质呈红色荧光。凋亡 细胞核染色质呈黄绿色，浓集于核膜内部，细胞膜呈泡状，凋亡可见小体。3.台盼蓝染色:如果细胞膜不完整或破裂，台盼蓝染料进入细胞和细胞变蓝，即为坏死。

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该方法有助于反映细胞膜的完整性和区分坏死细胞。4.TEM观察:凋亡 细胞表面微绒毛消失，核染色质浓缩、边缘突出，常呈新月形，核膜皱缩，细胞质致密，细胞细胞膜浓缩，细胞膜起泡或“出芽”和/或。2.DNA凝胶电泳(一)检测Principle细胞Occurrence凋亡或坏死，伴细胞DNA全部断裂，细胞内部小分子量DNA。

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1)PS(磷脂酰丝氨酸)on 细胞外膜检测:PS从细胞内膜转移到外膜on 细胞已接收。膜联蛋白(AnnexinV)是一种钙依赖的磷脂结合蛋白，能特异性结合暴露在膜外的PS，然后通过简单的显色或发光体系即可进行检测。因为这是一种凋亡早期活动细胞 检测(悬浮细胞和粘附细胞均适用)可以配合DNA染料或其他后期使用。

其中，膜联蛋白EGFP(增强型绿色荧光方案)和带荧光标记的膜联蛋白VFITC具有较高的灵敏度，可作为筛查的依据凋亡细胞 FACS。因为融合蛋白AnnexinVEGFP，EGFP与PS的结合比例为1: 1，也可以量化检测，此外，还提供了生物素偶联的AnnexinV，可通过普通酶联显色反应检测获得。